本周为大家带来的文献为发表Evid Based Complement Alternat Med.的” Baicalin Downregulates RLRs Signaling Pathway to Control Influenza A Virus Infection and Improve the Prognosis ”。本文使用了LabEx提供的MSD检测服务。

流感是一种由流感病毒引起的急性呼吸道疾病，威胁着公共健康。难以忘怀的1918年西班牙流感大流行感染了超过十亿人，并导致全球大约5000万人死亡。在过去的二十年里，H1N1、H5N1和H7N9等流感病毒轮流袭击人类健康，显著增加了全球健康负担。

目前，最广泛使用的两种抗病毒药物是金刚烷类药物和神经氨酸酶抑制剂（NAIs）。它们通过抑制病毒复制过程，取得了一些积极的抗流感治疗效果。然而，耐药病毒株的传播限制了它们在应对未来流感大流行中的疗效。此外，本研究中使用的阳性对照药物利巴韦林也显示出良好的抗病毒效果。作为一种类似鸟嘌呤或腺嘌呤的病毒RNA致死性诱变剂，利巴韦林通过引起RNA复制中的突变来阻止病毒蛋白的合成，并限制病毒RNA的复制。然而，高效剂量和不良反应限制了利巴韦林作为抗流感药物的应用。鉴于中草药在抗流感中表现出色，它们在未来可能具有广阔的发展前景。

黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）是一种常用的草药，在传统配方中表现出多种治疗效果。黄芩苷是从这种草药的根部提取出的黄酮类化合物，是其主要有效成分。先前的研究表明，黄芩苷对H1N1和H3N2病毒的神经氨酸酶具有明显的抑制作用，并调节了流感病毒编码的NS1蛋白的功能。目前，大多数关于黄芩苷抗流感作用的研究都集中在病毒复制抑制机制上。然而，其良好的抗流感效果也表现在控制流感引起的肺部感染中的保护作用。黄芩苷如何影响先天免疫途径并限制流感引起的肺部感染的免疫病理损伤尚未完全解释。因此，本研究集中于黄芩苷在流感感染中的保护作用，特别是其对RLRs先天免疫途径的影响以及对预后改善的作用。

LabEx提供的MSD检测服务

采用Meso Scale Discovery (MSD) 电化学发光技术测量在炎症反应和免疫系统调节中起重要作用的细胞因子。提取肺组织上清液以测量肺部的细胞因子水平。V-PLEX Proinflammatory Panel 1 Mouse Kit (#K15048D-1, LabEx)。该试剂盒提供了用于定量测定IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12p70、KC/GRO和TNF-α的特定检测组件。根据制造商的说明，将参考标准进行梯度稀释以制作标准曲线。样品被稀释至相同浓度并分别加入炎症因子1号板中。样品按以下步骤处理：室温孵育、洗板、加入抗体、再次孵育、加入读取缓冲液，最后通过MSD QuickPlex SQ120进行检测和分析。

MSD技术用于检测炎症细胞因子的表达。测量了十种与炎症相关的细胞因子浓度，以验证黄芩苷的干预效果。其中，IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-5、IL-6、IL-12p70、TNF-α和KC/GRO因其促炎作用而受到关注，而IL-4和IL-10则因其抑炎作用而引起更多重视。

MSD技术用于检测炎症细胞因子的表达。(a) 检测肺部促炎细胞因子，包括IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-5、IL-6、IL-12p70、TNF-α和KC/GRO的表达变化。(b) 检测肺部抗炎细胞因子IL-4和IL-10的表达变化。

重要发现

研究中使用PCR和Western blot检测RLRs信号通路中一些关键因子的变化。通过MSD电化学发光技术测量肺部炎症细胞因子的表达水平，包括IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12p70和KC/GRO。流式细胞术用于检测Th1、Th2、Th17和Treg的比例。结果显示，IAV感染导致体重下降、病毒载量升高，RIG-I、IRF3、IRF7和NF-κB mRNA，以及RIG-I和NF-κB p65蛋白的高表达。然而，黄芩苷能够减少体重下降的速度，抑制病毒复制，并下调RLRs信号通路的关键因子。此外，黄芩苷还减少了肺部高表达的炎症细胞因子，并降低了Th1/Th2和Th17/Treg的比例，从而引发了短暂但不过度激烈的炎症反应。因此，黄芩苷激活了平衡的宿主炎症反应，限制了免疫病理损伤，有助于改善临床和生存结果。