Q:如何设置对照？

A:①阴性对照（纯细胞）②阳性对照（单一荧光素偶联抗体染色）③同型对照

Q:为什么要进行Fc受体封闭？

A:单核细胞、B细胞、DC细胞、NK、巨噬细胞、粒细胞、肿瘤细胞等高表达 FcR，在检测这些细胞时，会与抗体的Fc段非特异性结合，产生假阳性信号。因此，流式检测这些细胞时，推荐使用相应物种的血清或者商品化的Fc受体封闭剂。

Q:实验室流式的染色方法？

A:一般推荐室温避光染色15分钟，或4℃染色30分钟。具体参照抗体说明书。

Q:流式设门要考虑哪些因素？

A:排除细胞碎片；进行死活鉴定；应用合适的阴性对照；分群不明显的，根据同型对照和FMO圈出阳性比例；查阅文献了解阳性比例。

Q:什么是补偿微球？

A:由于荧光光谱的重叠现象，在进行流式多色分析时，必须设置单染管进行荧光补偿调节。补偿微球大小和淋巴细胞相当，可连接各种荧光标记的抗体来调节补偿。可以像待测的样本细胞一样在相同的实验条件下固定，破膜等，操作起来简单方便，结果准确。克服了以往做多色流式分析时补偿难调，耗费样本（往往用待测样本单标来进行补偿调节），专业要求高等缺点。

Q:什么是同型对照？

A:同型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量的同型免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的假阳性干扰。同型对照即为阴性对照，其主要目的是确定一抗的结合是特异性的，而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用。同型对照还可以用来竞争性的结合抗体，与功能阻断抗体发挥同样的功能。

Q:染色指数是什么？

A:染色指数（SI）可用于比较不同荧光染料在流式细胞术应用中荧光亮度的差异。该值通过使用阳性区域的平均荧光强度（MFI）减去阴性区域的平均荧光强度得到的差值，再除以两倍的阴性区域标准差获得。染色指数越大，荧光强度越高。进行抗体滴度的时候，根据染色指数来选择最适合的抗体用量。

Q:流式细胞仪上的FL2-W、FL2-A 、FL2-H 分别是做什么的？

A:FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度， FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用，用于去除粘连细胞。

Q:抗体染色后的细胞不能立即检测该如何处理?

A:如果抗体染色后不能尽快上机，可以放在冰箱避光保存最长24h。但是遇到对细胞活性比较高的实验，应尽快上机检测。如果在短时间内无法上机检测，可以选择使用2%的多聚甲醛进行固定，固定后放于4℃保存，一般可保存在2天左右。另外固定完的细胞形态会发生一定的变化，可能会影响FSC-SSC图中各细胞系的位置。