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聊到信号通路蛋白的检测，相信大家的第一反应就是WB，但事实上从灵敏度而言，MSD平台才是最佳选择，因为我们知道信号通路蛋白的表达并没有那么高，选一个超灵敏的检测方式，才能获得较佳的结果。
MSD作为现阶段灵敏度较高的检测技术，不仅在常规生物标志物检测方面表现出众，在信号通路研究中也是研究者的首选。
MSD成品试剂盒表现：
就以AACR拜耳报告：EGFR表达与磷酸化对EGFR抑制剂治疗头颈部鳞癌有预测作用为例
 
化合物剂量依赖性地降低了Akt和ERK的磷酸化比例（RBL-2H3 cells）
 
RBL-2H3 cells were incubated with 1 μM, 5 μM, or 25 μM compound for 2 h and then stimulated with dinitrophenyl– human serum albumin for 15 min. Cells were lysed, and a specific amount of lysate was tested in the pAkt/tAkt
(A) and pERK/tERK (B) MSD plates. MSD assays were performed using the Syk inhibitor as a positive control. (C) pSTAT5/ tSTAT5, (D) pp38/tp38,(E) pJNK/ tJNK, and (F) pGSK3β/tGSK3β.
物种涵盖 Human(H), Mouse (M), NHP(P), Rat (R)
| Analyte |
Species |
| 4E-BP1 |
H |
| 4E-BP1 (pT37/46) |
H, M |
| Akt (pT308)* |
H, M |
| Caspase-3* |
H |
| Caspase-3 (p20/p17) (cleaved) |
H |
| CHOP |
H, M, R |
| c-Kit |
H, M, R |
| EGFR* |
H |
| EGFR (pY1173) |
H |
| eIF4E (pS209) |
H |
| ErbB2* |
H |
| ErbB2 (pY1248)* |
H |
| ERK-1/2 |
H, M, R |
| ERK-1/2(pT202/ pY204) (pT185/pY187) |
H, M, R |
| FOXO3a |
H, M |
| FOXO3a (pT32) |
H, M, R |
| FRS2 (pY196) |
H, M |
| FRS2 (pY436) |
H, M |
| GAPDH |
H, P |
| GSK-3a (pS21) |
H |
| GSK-3b (pS9)* |
H, M, R |
| HIF-1a |
H, M, R |
| Histone H3 (pS10) |
H, M, R |
| HSP70 |
H |
| IGF-1R (pY)** |
H |
| IRS-1 (S312) |
H |
| P-JNK* |
H |
| MEK 1/2 (pS217/ pS221) |
H, M, R |
|
|
| Analyte |
Species |
| NFkB (pS468) |
H, M, R |
| NFkB (pS536) |
H, M, R |
| p38 (pT180/pY182)* |
H, M, R |
| p53* |
H, M, R |
| p62 (SQSTM1) |
H, M, R |
| p70S6K |
H, M, R |
| p70S6K (pT389) |
H, M, R |
| p70S6K (pT421/ pS424) |
H, M, R |
| PARP |
H |
| pDGFR-b (pY751) |
H, M |
| PERK |
H, M, R |
| PERK (pT980) |
R |
| PRAS40 |
H |
| PRAS40 (pT246) |
H, M, R |
| PSD-95 |
H, M, R |
| S6RP |
H, M, P, R |
| Sclerostin |
H |
| STAT3 |
H, M, R |
| STAT3 (pY705) |
H, M, R |
| STAT4 |
H, M, R |
| STAT4 (pY693) |
H, M, R |
| STAT5a/b |
H, M, R |
| STAT5a/b (pY694) |
H, M, R |
| VASP |
H |
| VASP (pS157) |
H |
| VEGFR2/KDR |
H |
| Wnt3a |
H, M, R |
| XBP-1 |
H, M, R |
|
磷酸化 / Total 蛋白 2因子试剂盒
| Species |
Analyte |
| Human,Mouse, Rat |
Akt pS473/Total |
| Human |
Caspase-3 (Cl. p20/p17)/Total |
| Human |
EGFR pY1173/Total |
| Human |
ErbB2 pY1248/Total |
| Human,Mouse, Rat |
ERK1/2 (pT202/pY204)/(pT185/pY187)/Total |
| Human,Mouse, Rat |
GSK-3b pS9/Total |
| Human |
JNK (pT183/pY185)/Total |
| Human,Mouse, Rat |
MEK1/2 (pS217/221)/Total |
| Human,Mouse, Rat |
p38 (pT180/pY182)/Total |
| Human,Mouse, Rat |
p53 Ub/Total |
| Human,Mouse, Rat |
p70S6K (pT421/pS424)/Total |
| Human,Mouse, Rat |
STAT5a,b pY694/Total |
信号通路多因子试剂盒
| Species |
Name |
Analytes |
| Human,Mouse, Rat |
Akt Signaling Panel(Phosphoprotein) |
pAkt, p70S6K, pGSK-3b |
| Human,Mouse, Rat |
Akt Signaling Panel (Total Protein) |
Akt, p70S6K, GSK-3b |
| Human,Mouse, Rat |
Akt Signaling Panel II(Phosphoprotein) |
pAkt, p70S6K, pGSK-3b, pS6RP |
| Human |
Apoptosis Panel |
pp53, p53, Cl. Caspase-3, Cl. PARP |
| Human,Mouse, Rat |
ERK-STAT3 Cascade Panel |
pERK1/2, pMEK1/2, pSTAT3 |
| Human |
Insulin Signaling Panel(Phosphoprotein) |
pIR, pIGF-1R, pIRS-1 |
| Human |
Insulin Signaling Panel(Total Protein) |
IR, IGF-1R, IRS-1 |
| Human,Mouse, Rat |
MAP Kinase Panel(Phosphoprotein) |
pERK1/2, pJNK, p38 |
| Human |
MAP Kinase Panel (Total Protein) |
ERK1/2, JNK, p38 |
| Human,Mouse, Rat |
Phospho-STAT Panel |
pSTAT3, pSTAT4, pSTAT5a,b |
那如果没有成品试剂盒，该怎么办？LabEx只回复两字“好办”
MSD开发平台表现
RIPK1 是受体相互作用蛋白（RIP）激酶家族的一员，参与了决定细胞“生死存亡”的多种重要信号通路，其激酶活性在RIPK1依赖的细胞凋亡和细胞程序性坏死进程中发挥重要的调节作用。
如何检测？
由于RIPK1属于信号通路蛋白，除了WB以外，老师们还能采用何种高灵敏度方法进行检测呢？相信下面一篇文章，可以给到大家答案
《DNL104, a centrally penetrant RIPK1 inhibitor, inhibits RIP1 kinase phosphorylation in a randomized phase I ascending dose study in healthy volunteers》
DNL104是一种选择性的中枢神经系统渗透性RIPK1活性抑制剂。DNL104抑制RIPK1信号的作用，可以通过其阻断啮齿动物急性TNF-α刺激所产生的下游效应的能力来证明，包括RIPK1的磷酸化程度增加、细胞因子释放增多和体温降低。在体外，利用TNF-α刺激人的PBMC进行相关研究，DNL104阻断了丝氨酸166处RIPK1的磷酸化。
这篇文献报告了DNL104第一阶段研究的结果，评估了健康志愿者单\多剂量递增研究中的耐受性、安全性、药代动力学和药效动力学的情况。
结果表明，DNL104可以抑制健康志愿者的RIPK1磷酸化，而不影响中枢神经系统，但同时也表明在多次上升剂量中存在一些肝脏毒性问题，这个有待进一步研究
文章中采用的检测技术平台，为MSD超敏电化学发光平台，正如上文说到的，RIPK1蛋白属于信号通路蛋白，其表达量相对较低，采用MSD是较好的选择。
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