本周为大家带来的文献为2024年4月发表于Adv Sci (Weinh)（IF：15）的文献‘DNMT3A Cooperates with YAP/TAZ to Drive Gallbladder Cancer Metastasis’。

胆囊癌（GBC）是胆道癌症中最常见的类型，也是一种罕见但致死率极高的恶性肿瘤。肿瘤转移是相关死亡的主要原因。GBC进展过程中侵袭性表型的形成源于遗传和表观遗传失调，包括体细胞突变和扩增、DNA甲基化和组蛋白修饰。然而，GBC中这些基因高甲基化的分子机制仍不清楚。

DNA甲基化主要发生在CpG二核苷酸中胞嘧啶的第五个碳（5-甲基胞嘧啶，5mC）上，由DNA甲基转移酶（DNMTs）介导，包括DNMT1、DNMT3A和DNMT3B。研究者曾报道DNMT3A可催化伸长子复合体亚基启动子区内的DNA甲基化，从而产生GBC的化疗抗性，也可作为治疗靶点，但其在推动GBC转移方面的作用仍不清楚，本文旨在探究相关机制。

LabEx提供的PCR array检测服务

通过LabEx提供的PCR array检测技术，研究者检测了84个肿瘤转移相关基因和5个看家基因。

重要发现

通过WB，免疫组化，比较总存活率等研究方法，研究者确定了DNMT3A在病理和临床上与GBC患者的侵袭性和预后有关。为了验证DNMT3A驱动GBC肝转移这一假设，研究者在体外和体内检测了DNMT3A在GBC细胞中的生物学功能，并确定了DNMT3A促进GBC转移的方式取决于其DNA甲基转移酶活性。

为了研究DNMT3A产生的上述结果是否与GBC的侵袭性特征有关，研究者对GBC肿瘤组织的转录组进行了基因组富集分析（Gene Set Enrichment Analysis, GSEA）。研究表明上皮细胞向间质转化（EMT）在高表达DNMT3A的病人中有富集。DNMT3A缺乏会恢复上皮标记CDH1（编码E-cadherin蛋白）的表达，但会降低间质标记N-cadherin的表达。下一步研究者试图确定DNMT3A抑制CDH1转录的机制，以确定其对EMT的促进作用。

研究者通过使用亚硫酸氢盐测序PCR（BSP）检测法来观察CDH1启动子上CGI的甲基化状态，研究DNMT3A能否使GBC细胞中CDH1启动子上的CGI甲基化，再通过MS‐qPCR验证。这些结果表明DNMT3A通过催化CDH1启动子的超甲基化来抑制CDH1的表达，从而推动GBC细胞的EMT过程。

研究者下一步假设YAP因子与GBC中的DNMT3A表达相关，利用PCR阵列对去除了DNMT3A 的 GBC 细胞和对照组细胞进行肿瘤转移相关基因表达谱分析。结果表明，DNMT3A耗竭改变最多的失调基因是共转录因子YAP/TAZ的下游靶标（图a），它们在DNMT3A耗竭细胞中的表达变化与YAP耗竭在GBC细胞中的变化高度一致。其他研究结果共同表明DNMT3A与YAP/TAZ合作，在GBC中产生侵袭行为。

基于PCR阵列的肿瘤转移相关基因分析表明，YAP/TAZ转录靶标在去除了DNMT3A的细胞和对照组NOZ细胞中的表达不同。

之后研究者探究到DNMT3A和YAP/TAZ可通过YAP/TAZ招募DNMT3A结合到CDH1启动子并催化CDH1启动子中CGI的超甲基化，从而在功能上相互作用抑制CDH1的转录，而且YAP/TAZ是DNMT3A识别启动子上特定CGI的必要条件。总的而言，DNMT3A需要YAP/TAZ来识别、访问CDH1启动子并使其超甲基化，从而加速EMT进程，推动GBC转移