本周为大家带来的文献为发表于Aging (Albany NY) (IF: 5.2)的” Neutrophil extracellular traps amplify neutrophil recruitment and inflammation in neutrophilic asthma by stimulating the airway epithelial cells to activate the TLR4/ NF-κB pathway and secrete chemokines”。本文使用了LabEx提供的Luminex检测服务。

哮喘可分为嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜中性粒细胞性哮喘（NA）、混合粒细胞性哮喘和白细胞性哮喘。中性粒细胞性哮喘的特征是具有明显的中性粒细胞浸润。中性粒细胞是外周血中数量最多的先天性免疫细胞，是人体抵御病原体入侵的第一道防线。在急性炎症中，中性粒细胞会产生中性粒细胞胞外捕获物（NET）。然而，NET在哮喘中所起的作用尚不明确。

本研究假设，NET 通过刺激人支气管上皮细胞（HBE）和人肺泡上皮细胞（HAE）表达趋化因子，从而招募大量中性粒细胞。研究人员在体外和体内评估了NET的促炎作用。在 NA 小鼠模型中发现了 NETs 的形成和中性粒细胞的蜂拥。此外，研究还发现，NET通过 TLR4/NF-κB 途径刺激气道细胞表达 CXCL1、CXCL2 和 CXCL8，从而将中性粒细胞招募到炎症部位。此外，防止NET形成可减少肺中性粒细胞的招募，从而减轻中性粒细胞炎症。此外，NET的结构完整性对肺中性粒细胞的招募和中性粒细胞炎症没有影响。在NA小鼠中，NET可触发气道和肺泡上皮细胞表达趋化因子，从而通过激活TLR4/NF-κB途径招募更多的中性粒细胞。

LabEx提供的Luminex检测服务：

使用 Luminex 检测法检测细胞因子浓度按照试剂盒（LXSAHM-03）和仪器提供的说明进行 Luminex 检测。浓度由Univ-bio（LabEx）检测。

用NETs处理HBEs或A549细胞24小时后，收集细胞培养上清进行Luminex和透孔分析。与对照组相比，NETs 处理组的 HBE 和 A549 培养上清液中CXCL1、CXCL2 和 CXCL8 的表达明显增加，但 HBE 中的 CXCL1 除外。

NET 刺激 HBEs 和 A549 表达中性趋化因子。(A 和 B）上清液中 CXCL1、CXCL2 和 CXCL8 的表达采用 Luminex 和 RT-qPCR 分析。

重要发现：

NETs在急性炎症中的作用：中性粒细胞通过一种程序性细胞死亡过程生成NETs（中性粒细胞外陷阱），这些NETs在急性炎症中起关键作用，尤其在NA（中性粒细胞性哮喘）小鼠中，通过促进后续中性粒细胞的募集。

NETs与呼吸道疾病的关系：NETs在哮喘和慢性阻塞性肺病（COPD）患者的气道中存在，并与炎症相关。NETs的形成可促进Th1和Th17细胞的分化，诱导COPD，以及在气道上皮细胞中引发IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症细胞因子的分泌。

中性粒细胞化学趋化作用：NETs刺激气道细胞（如HBEs和A549细胞）分泌CXCL1、CXCL2和CXCL8等趋化因子，从而吸引中性粒细胞迁移。这表明NETs通过促进气道细胞分泌趋化因子，招募更多中性粒细胞。

TLR4/NF-κB信号通路的激活：TLR4/NF-κB信号通路在NA模型和NETs刺激的HBEs及A549细胞中被激活。TLR4特异性抑制剂TAK-242能沉默该信号通路，减轻炎症反应和气道阻力，减少CXCL1、CXCL2和CXCL8趋化因子的生成，抑制中性粒细胞迁移浸润。

NETs与气道阻力的关系：研究显示，抑制TLR4和中性粒细胞弹性蛋白酶能降低气道阻力，而DNase I的效果不显著。尽管如此，目前尚未发现直接证据表明NETs或中性粒细胞与气道高反应性相关。

中性粒细胞募集的放大循环：研究展示了中性粒细胞募集的放大循环：第一波中性粒细胞因过敏原或刺激物引发的早期炎症反应而被募集，NETs的生成导致中性粒细胞死亡并释放到细胞外，刺激气道上皮细胞和HAEs释放趋化因子，通过TLR4/NF-κB途径招募更多中性粒细胞，新招募的中性粒细胞再次激活并生成NETs，进一步增强炎症反应。