小备说流式-小鼠骨髓细胞分群案例分享
LabEx用BD Celesta(3激光12色)对小鼠骨髓细胞进行分群分析实例
整个panel全部为包括表面marker、胞内因子和核内转录因子,抗体使用量按照厂商推荐。
样本类型:小鼠
仪器:BD Celesta
实验Panel:
配色表 |
Laser |
指标 |
荧光素 |
Violet Laser (405nm) |
FVS510 |
BV510 |
|
Blue Laser(488nm) |
CD11B |
FITC |
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CCR2 |
PECY7 |
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LY6G |
PE |
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Red Laser(633nm) |
GR-1 |
APC |
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CD45 |
APCCY7 |
实验设置:
组别 |
作用 |
Blank |
调节电压,确认阴性细胞群位置 |
补偿对照 |
调节补偿 |
样本管 |
正式样本管 |
实验步骤:
细胞表面染色
(1) 使用冷的 PBS 缓冲液洗细胞两次,再用 1X PBS 缓冲液制成 1X 106 细胞/ml 的悬液。
(2) 设置流式 Blank、补偿对照以及样本管。
(3) 各组依说明书加入适量的FC block,2-8°C 避光孵育10 分钟,随后加1ml PBS清洗细胞,离心 500g,5min,1ml重悬。
(4) 各组依说明书加入适量的死活染料,室温避光孵育 15 分钟,离心 500g,5min。随后加1ml Stain Buffer(554656)清洗细胞,离心500g,5min,100 µl 重悬。
(5) 各管依说明书加入适量的细胞表面荧光抗体,常温避光孵育15分钟。随后加1ml PBS 清洗细胞,离心500g,5min。
实验结果:
流式Panel现货清单: