本文为对发表于《Signal Transduct Target Ther》的论文“Incorporation of a Toll-like receptor 2/6 agonist potentiates mRNA vaccines against cancer and infectious diseases（掺入 Toll 样受体 2/6 激动剂可增强 mRNA 疫苗对抗癌症和传染病的能力）”的分享，本文使用了LabEx提供的Luminex检测服务，检测了多种细胞因子的表达。

mRNA 疫苗逐渐成为人们关注的焦点，针对 SARS-CoV-2 的 mRNA 疫苗经历了从实验室到临床的快速转变，并在抗击 COVID-19 大流行中做出了突出贡献。

Pam2Cys 是一种简单合成的中性脂肪氨基酸，易于获得和代谢，仅由一个半胱氨酸、一个硫代甘油和两个脂肪酸残基组成。Pam2Cys 及其衍生物通过 TLR2/6 途径发出信号，已被证明可引发体液和细胞适应性免疫反应。它具有亲脂性，高效力等特点，作为一个候选佐剂，具有很强优势。

在这项研究中，Pam2Cys 被整合到 mRNA-LNP 中，以提高 mRNA 疫苗的功效。之后将mRNA用于多种疾病模型中测试，为未来潜在的临床应用提供数据。

研究者先进行了掺入Pam2Cys 的 mRNA 疫苗的制备，获得比常规尺寸更小，具有相似包封效率和良好的多分散性指数。同时在注射部位产生相似水平的靶基因表达，但在肝脏中产生较小程度的靶基因表达水平（图1）。

在肌内给药后的24小时后，研究者通过Luminex测量了dLN中细胞因子水平变化，以此反应疫苗形成的免疫环境（LabEx提供Luminex检测技术服务）。促炎细胞因子（IL-1β和TNF-α）和趋化因子MIP-1β水平显著升高，但同样是促炎症因子的IL-6显著降低。观察到对应的细胞因子水平显著升高，表明疫苗诱导了 Th1 和 Th17 偏向的免疫反应。

通过流式细胞术分析迁移的 cDC2 和驻留cDC2 中的MHC-I 抗原呈递。结果表明，OVA 表位呈递 cDC2 的出现频率高于 cm 疫苗组。此外，疫苗接种引起dLN 中 cDC2 的比例升高，诱导分泌 IL-12 p70和IL-6。

结合以上结果，使用 pm 疫苗进行免疫可以通过诱导 IL-12 和 IL-17 等细胞因子来形成免疫反应，并通过引流淋巴结中的迁移和驻留 cDC2 将抗原有效呈递给 T 细胞。

接下来，OVA pm 疫苗在预防性和治疗性肿瘤模型中进行测试。

治疗环境中的E.G7-OVA肿瘤模型：OVA pm 疫苗组中的小鼠肿瘤50%观察到根除，其他组则是0%。同时，OVA pm 疫苗显著减轻了肿瘤负荷，并提高了小鼠生存率。但在CD4 和 CD8a 基因敲除 (KO) 小鼠中则观察不到OVA pm 疫苗的功效，因此认为疫苗的抗肿瘤效力严重依赖CD4 +和 CD8 + T 细胞免疫。

预防性环境中的E.G7-OVA肿瘤模型：OVA pm 疫苗组中 70% 的小鼠保持无肿瘤状态，相较之下，只有 20% 的OVA cm 疫苗组小鼠保持无肿瘤状态。OVA pm 疫苗组的肿瘤出现明显延迟，负担显著减轻，生存率大大提高。OVA pm 疫苗组免疫后 7 天，循环中OVA 特异性 CD8 + T 细胞的比例显着较高，表明抗原特异性 T 细胞的有效激活和动员。

CT26结肠癌模型：含有20μg CT26新抗原mRNA的pm疫苗可以根除10% 的小鼠体内已形成的肿瘤，延缓了肿瘤生长，并显著提高了生存率。

SARS-CoV-2 刺突疫苗：研究者使用新冠病毒模型来研究pm疫苗引起的体液反应。结果表明，含有SARS-CoV-2 刺突 mRNA 的 pm 疫苗引发显著更高的受体结合域结合IgG滴度和spike protein中和抗体滴度。此外，Spike pm 疫苗组中检测到显著的IFN-γ ⁺ CD8 ⁺ T 细胞和IL-4 ⁺ CD8 ⁺ T细胞和IL-4 ⁺ CD4 ⁺ T细胞。

70 天的随访期间，接种 PM 疫苗的小鼠没有表现出总体特征的改变，例如体重减轻、皮毛皱起、行为等。同时，在pm疫苗免疫后45天，安乐死的小鼠的重要器官，例如心脏、肝脏、脾、肺和肾(图7 )没有组织病理学变化。

文章讨论了如何将 Pam2Cys（一种可通过 Toll 样受体（TLR）2/6 途径发出信号的简单合成代谢脂氨基酸）纳入 mRNA 脂质纳米颗粒（LNPs），以实现与 mRNA 的共同递送。使用由此产生的 mRNA-LNPs （Pam2Cys）进行免疫，可通过诱导 IL-12 和 IL-17 等细胞因子改善引流淋巴结（dLNs）的免疫环境。抗原呈递主要由迁移性和dLN驻留的常规2型DC（cDC2s）进行，在预防性和治疗性肿瘤模型中，CD4+和CD8+T细胞依赖性的抗肿瘤反应明显更强。同时还建立了记忆性抗肿瘤免疫。此外，该疫苗还在代用 COVID-19 预防模型中激发了更强的体液免疫和细胞免疫。文章的结论是，这些事实证明了未来开发 Pam2Cys 嵌体 mRNA 疫苗或相关 mRNA 疗法用于临床应用的必要性。