样本前处理
组织:无菌切取适量(0.5-30mg)的组织样本,使用无RNase 酶的水快速冲洗样本,放入10 倍体积的RNAlater(76104/76106)中,-80℃保存
注:
1、收集样本时,至少使用10 倍体积的RNAlater(或每1 mg 组织约10 μlRNAlater)浸泡组织。样本厚度需<0.5cm,冷冻样本不适用于RNAlater中稳定。小器官(小鼠等)可不进行切割。
2、提取试剂盒:RNeasy Mini Kit(74104)+RNase-Free DNase Set(79254)
注意事项
1、一旦选定样品基质,则同一项目的不同次/期实验都只能选择同样的样品基质及其处理方法!
2、必须避免总脂血症的血清和有溶血现象的血清,尽量避免有溶血,高血脂的样本
3、根据研究需求选择血清/血浆
4、尽量选择最多的多重靶标的检测值落在检测工作范围(LLOQ-ULOQ)之内的样本基质,这样有利于提高检测精确度和准确度。
5、根据某些文献,唾液可能含有高丰度的某些心血管相关标志物( MPO, SAA, and Lipocalin-2/NGAL),避免唾液污染
6、某些心血管标记物(如D-dimer) 建议使用血浆
7、如果用于糖尿病/代谢的标志物表达谱分析,则必须加入蛋白酶抑制剂。
8、若使用肝素(heparin)抗凝,可导致Troponin-I 和 troponin-T偏低(吸附导致)
9、某些文献表明若使用肝素或柠檬酸钠抗凝,可导致VEGF, MCP-1, eotaxin, factor VII偏高
10、在某些文献的对比实验中,a-2 Macroglobulin, BDNF, EGF, ENA-78, IL-8, PAI-1, and TIMP-1 在血清中的表达高于血浆 (EDTA, 柠檬酸钠或肝素抗凝)