单多因子实验样本处理——细胞、组织裂解液
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样本前处理

细胞裂解液:消化收集细胞,PBS 清洗后,离心10min1000g4℃),弃去上清,加入适量裂解液(107 细胞对应200ul 裂解液),放置于4℃冰箱(20min)后,离心10min13000rpm4℃),取上清,建议进行两次离心和取上清,测定BCA 总蛋白浓度,-80℃保存

组织裂解液:适量裂解液加入组织中(20mg 对应200-300ul 裂解液),组织破碎器处理组织至匀浆(冰上处理),放置于4℃冰箱(20min

后,离心10min13000rpm4℃),取上清,建议进行两次离心和取上清,测定BCA 总蛋白浓度,-80℃保存

 

注意事项

1、检测代谢标志物时,需要根据试剂盒说明书添加酶抑制剂,然后再放入-80℃保存。酶抑制剂建议采用SigmaDPP4-MDPP-IV 酶抑制剂,终浓度1mM)和蛋白酶抑制剂即可

2、裂解液(推荐爱必信abs9225,需另外再加酶抑制剂)中不能含有SDS 等离子去垢剂成分,需要加入酶抑制剂,防止降解。高浓度的SDS 等离子去垢剂会影响到检出率

3、细胞裂解液和组织裂解液在实验前,需要进行BCA总蛋白定量

4、细胞、组织裂解液不能含有SDSNP40去垢剂成分,高浓度的SDS会影响蛋白检出效果

 

样本处理视频

细胞裂解液:https://www.u-labex.com/article-6055.html

组织裂解液:https://www.u-labex.com/article-6056.html

 

 

详见LabEx网站( www.u-labex.com)或来电咨询!
基因水平:PCR Array、RT-PCR、PCR、单细胞测序
蛋白水平:MSD、Luminex、CBA、Elispot、Antibody Array、ELISA、Sengenics
细胞水平:细胞染色、细胞分选、细胞培养、细胞功能
组织水平:空间多组学、多重荧光免疫组化、免疫组化、免疫荧光
数据分析:流式数据分析、组化数据分析、多因子数据分析
联系电话:4001619919
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公众平台:多因子及组学服务专家