样本前处理
细胞裂解液:消化收集细胞,PBS 清洗后,离心10min(1000g,4℃),弃去上清,加入适量裂解液(107 细胞对应200ul 裂解液),放置于4℃冰箱(20min)后,离心10min(13000rpm,4℃),取上清,建议进行两次离心和取上清,测定BCA 总蛋白浓度,-80℃保存
组织裂解液:适量裂解液加入组织中(20mg 对应200-300ul 裂解液),组织破碎器处理组织至匀浆(冰上处理),放置于4℃冰箱(20min)
后,离心10min(13000rpm,4℃),取上清,建议进行两次离心和取上清,测定BCA 总蛋白浓度,-80℃保存
注意事项
1、检测代谢标志物时,需要根据试剂盒说明书添加酶抑制剂,然后再放入-80℃保存。酶抑制剂建议采用Sigma:DPP4-M(DPP-IV 酶抑制剂,终浓度1mM)和蛋白酶抑制剂即可
2、裂解液(推荐爱必信abs9225,需另外再加酶抑制剂)中不能含有SDS 等离子去垢剂成分,需要加入酶抑制剂,防止降解。高浓度的SDS 等离子去垢剂会影响到检出率
3、细胞裂解液和组织裂解液在实验前,需要进行BCA总蛋白定量
4、细胞、组织裂解液不能含有SDS和NP40去垢剂成分,高浓度的SDS会影响蛋白检出效果
样本处理视频
细胞裂解液:https://www.u-labex.com/article-6055.html
组织裂解液:https://www.u-labex.com/article-6056.html