Q:预实验结果不好,怎么办?
A:①:先看这些指标平时的表达量;再结合试剂盒类型,高敏或普通的;是否需要换试剂盒。②:增加孵育时间和降低稀释比例。
Q:结果中细胞和组织裂解液最终的浓度该如何采用?
A:需将最终获得的因子浓度除以细胞或者组织的BCA总蛋白浓度,做一个调平之后,再进行浓度比较
Q:多因子实验中,为什么最终的检测结果浓度低?
A:所有单多因子检测技术都会因为灵敏度和蛋白表达丰度的原因出现或多或少的因子检测不出或者浓度值偏低,在确认操作和实验无误的情况下(根据标曲或质控判断),这是正常情况,同时也是实际情况。所以研究者在应用上述技术时务必知晓。
Q:样本表达量正常,但为什么没有预期趋势?
A:实验预期是研究者针对课题进行的的猜想,可能出现不同的结果。不符合预期的结果可能才反应了机体的真实变化。
Q:该用什么样的拟合方法,4P还是Cubic?
A:4P和Cubic是不同的拟合方式。我们一般选用4P拟合,有时拟合不出的关键原因是检测值超过试剂盒或拟合方法的下限,都显示小于号。因此cubic是个退而求其次的方式,但cubic拟合的结果也可以发表文献,也很可靠。我们推荐可以用4P拟合出来的因子,便继续用4P拟合,无法拟合的情况便采用Cubic,只要保证同一个指标用同一种拟合方式即可。