Q:如何取样，可以有更好的生物代表性？
A: 样本代表性：① ＞ ② ＞ ③＞ ④ ①：取不同部位的多个块状样本，分别检测 ②：取不同部位的多个块状样本，混一起检测 ③：取随机部位的一个横断面样本，进行检测 ④：取随机部位的一个块状样本，进行检测
Q：如何取样，有更好的组织活性？
A：去除杂质：用生理盐水清洗干净样本表面的血渍、筋膜等杂质 去除死组织：样本切割边缘的焦黑组织、肿瘤中心的坏死组织 手术操作流程的微调：避免脱离血供太长时间、避免浸泡/擦拭消毒 尽快处理：样本尽快置于冰上保存，尽快运输或后续酶解操作
Q：如何选择悬液制备方案？
A：解离越久、过程越复杂，细胞得率越高；操作越迅速，步骤越简单，细胞活性越好
Q：选择提核还是制备细胞悬液？
A：根据优劣势选择：
|
单细胞核测序的优势 |
单细胞核测序的劣势 |
|
需要妥善的前处理，以维持高活性的细胞→常规的冻存操作即可 |
细胞核内的RNA转录本数目少 |
|
酶解等其它前处理会带来转录组的应激改变→ “冻结”在收样的一瞬间 |
细胞核内的RNA转录本，大部分是不成熟的mRNA，带有大量Intron |
|
捕获对于细胞的形态、大小等都有限制→细胞核普遍在10μm以下 |
不利于特定细胞类型（免疫细胞）的捕获 |
Q：细胞悬液是否需要分选/烈红/去死细胞？
A：根据优劣势选择：
|
后处理的优势 |
后处理的优势 |
|
需要妥善的前处理，以维持高活性的细胞→常规的冻存操作即可 |
细胞核内的RNA转录本数目少 |
|
酶解等其它前处理会带来转录组的应激改变→ “冻结”在收样的一瞬间 |
细胞核内的RNA转录本，大部分是不成熟的mRNA，带有大量Intron |
|
捕获对于细胞的形态、大小等都有限制→细胞核普遍在10μm以下 |
不利于特定细胞类型（免疫细胞）的捕获 |
沪公网安备31011502400759号
营业执照(三证合一)
