Abstract

Purpose: CD19 chimeric antigen receptor (CAR)-T therapy has shown impactful results in treatment of B-cell malignancies. However, immune recognition of the murine scFv may render subsequent infusion(s) ineffective. Also, nonselective expansion of both CAR-transduced and nontransduced T cells during the production stage affects the yield and purity of final products. Here, we aim to develop a humanized selective (hs) CD19 CAR to solve the above problems.Experimental Design: A CD19 hsCAR was designed, which incorporated a short selective domain between the humanized heavy chain and light chain. The CAR was examined for its property, and then trialed in 5 highly treated B-ALL patients.Results: hsCAR possessed around 6-fold higher affinity to CD19 versus murine CAR (mCAR). Incubation with selective domain-specific mAbs (SmAb) selectively expanded CAR-transduced T cells, and led to a higher proportion of central memory T cells in the final products. SmAb-stimulated CD19 hsCAR-T cells exhibited superior antitumor cytotoxic functions in vitro and in vivo. Autologous (n = 2) and allogeneic donor (n = 3, with hematopoietic stem cell transplantation) hsCAR-T cells were infused into 5 patients who had relapsed after receiving mCAR-T treatments. Two patients received mCAR-T treatments twice previously but the second treatments were ineffective. In contrast, subsequent hsCAR-T treatments proved effective in all 5 patients and achieved complete molecular remission in four, including one with extramedullary disease with central nervous system involvement.Conclusions: hsCD19 CAR-T treatment shows efficacy in highly treated B-ALL patients who have relapsed after receiving CD19 mCAR-T therapies.

  

 PD-1/PD-L1在肺癌中的抗肿瘤中的应用

  

肺癌是世界范围内癌症相关死亡的主要原因，非小细胞肺癌(NSCLC)约占所有病例的80%。因此，为了让更多的人群受益，肺癌迫切需要发展免疫治疗与常规治疗相结合等创新治疗方法。其中测定循环和瘤内IL-10、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF使用MSD技术的U-plex生物标志物组。

  

基于同基因肺癌小鼠模型，本研究证明了低剂量的阿帕替尼可缓解缺氧，增加CD8+ T细胞的浸润，减少肿瘤中肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)的募集并减少肿瘤及血清中TGF-β水平变化。小剂量阿帕替尼联合抗PD-L1抗体可显著延缓肿瘤生长和转移，延长小鼠模型的生存时间。

  

 MSD技术在CAR-T细胞治疗研究中的应用

  

CAR-T疗法就是嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，英文全称Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy。这是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法。这些临床试验中使用的单链抗体序列是基于小鼠抗体序列，最近的研究证实，宿主免疫反应可以识别小鼠单链抗体的表位，并使随后的治疗无效。在本研究中，开发了一种人源化的CD19 CAR，并将10个氨基酸的E-tag作为scFv重链和轻链之间的选择域，hsCD19 CAR-T治疗在CD19 mCAR-T疗法治疗后复发的B-ALL患者中显示出疗效。

  

在小鼠白血病模型中，以正常健康人外周血单核细胞为研究对象，产生不同类型的外周血单核细胞CD19 CAR- t细胞，包括mCAR, hsCAR和对照hsCAR停止CAR，进行干预治疗。小鼠血清中细胞因子含量检测方式： MSD MULTI-SPOT Assay system (Meso Scale Diagnostics) 。用SmAb激活的hsCAR-T细胞治疗的小鼠显示出更长的生存期，显示出更高的促炎细胞因子（IFN-, IL-2, TNF- IL-6））浓度和更低的IL-15的浓度。

  

为了评估hsCAR-T细胞疗法的安全性，本研究检测5名患者血清中细胞因子的表达情况。人血清中细胞因子含量检测方式：Panel 1 (human) Kit of MSD MULTI-SPOT Assay system (Meso Scale Diagnostics)。患者1和患者3血清中检测到IL-2、IL-6、sCD25和TNF水平激增，在患者4和患者5的IL-6水平明显升高。

  

综上所述，研究结果证实了肠道菌群与血浆Aβ42/Aβ40可作为临床前AD的筛选工具而针对肠道菌群可能会为AD相关认知功能下降的治疗策略提供新的思路。

  

以上两篇文章中都有用到MSD电化学发光技术，该技术是基于ELISA基本原理的升级，在板底通电从而激发标记物SULFO-TAG发光并由CCDCamera进行信号采集；MSD ECL技术大大提高免疫分析的灵敏度，延伸了线性范围。MSD通 过点阵技术，在96孔石墨电极板里可实现10个指标／每孔的检测，同时实现多个指标的相对或绝对定量。

  

  
MSD电化学发光技术独具一格的“ 六合一”特点：

亚fg/ml灵敏度，低背景，多靶点检测，6个数量级线性范围，适用于不同样本基质 （ 血清／血浆， 细胞培养上清，脑脊液，尿液，组织匀浆，细胞裂解液）（人／猴子／小鼠／大鼠），5-25ul微量样本检测。

  

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