The objective of this study is to investigate the effects of baicalin on controlling the pulmonary infection and improving the prognosis in influenza A virus (IAV) infection. PCR and western blot were used to measure the changes of some key factors in RLRs signaling pathway. MSD electrochemiluminescence was used to measure the expression of pulmonary inflammatory cytokines including IFN-γ, TNF-α, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, and KC/GRO. Flow cytometry was used to detect the proportion of Th1, Th2, Th17, and Treg. The results showed that IAV infection led to low body weight and high viral load and high expression of RIG-I, IRF3, IRF7, and NF-κB mRNA, as well as RIG-I and NF-κB p65 protein. However, baicalin reduced the rate of body weight loss, inhibited virus replication, and downregulated the key factors of the RLRs signaling pathway. Besides, baicalin reduced the high expression inflammatory cytokines in lung and decreased the ratios of Th1/Th2 and Th17/Treg to arouse a brief but not overviolent inflammatory response. Therefore, baicalin activated a balanced host inflammatory response to limit immunopathologic injury, which was helpful to the improvement of clinical and survival outcomes.

本周为大家带来的文献为发表于Evid Based Complement Alternat Med.的” Baicalin Downregulates RLRs Signaling Pathway to Control Influenza A Virus Infection and Improve the Prognosis ”。本文使用了LabEx提供的MSD检测服务。

 

流感是一种由流感病毒引起的急性呼吸道疾病，对公共健康构成威胁。历史上，1918年西班牙流感大流行感染了大量人口并造成了数百万人的死亡。近年来，H1N1、H5N1和H7N9等流感病毒不断出现，增加了全球的健康负担。虽然现有的抗病毒药物如金刚烷类和神经氨酸酶抑制剂在治疗流感方面取得了一定的效果，但抗药性病毒株的出现限制了它们的疗效。此外，利巴韦林作为阳性对照药物也有良好的抗病毒效果，但其高效剂量和不良反应限制了其使用。中草药在抗流感方面表现出显著作用，具有良好的发展前景。

 

黄芩是一种常用的中草药，具有多种治疗效果。黄芩苷是黄芩的主要有效成分，先前研究表明其对多种流感病毒具有明显的抑制作用，并能调节病毒编码蛋白的功能。目前，大多数研究集中在黄芩苷抑制病毒复制的机制上。然而，黄芩苷在控制流感引起的肺部感染方面也显示出良好的保护作用。黄芩苷如何通过影响先天免疫通路来限制流感引起的肺部感染的免疫病理损伤尚未完全明了。因此，本研究旨在探讨黄芩苷在流感感染中的保护作用，特别是其对RLRs先天免疫通路的影响及其对预后改善的作用。

 

LabEx提供的MSD检测服务

使用Meso Scale Discovery (MSD) 电化学发光技术测量炎症反应和免疫系统调节中重要的细胞因子。提取肺组织上清液以测量肺部的细胞因子水平。V-PLEX炎症反应面板1鼠试剂盒（#K15048D-1，Meso Scale Discovery）。该试剂盒提供了定量测定IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12p70、KC/GRO和TNF-α的特定试剂。根据制造商的说明，将参考标准进行梯度稀释以制作标准曲线。样品被稀释到相同浓度并分别加入到炎症反应面板1的孔板中。样品处理步骤如下：室温孵育、洗板、加入抗体、再次孵育、加入读缓冲液，然后通过MSD QuickPlex SQ120（Meso Scale Discovery）检测和分析。

 

十种炎症细胞因子的表达结果如图7所示。总体趋势表明，与正常对照组相比，炎症细胞因子（包括促炎和抗炎细胞因子）的表达在V对照组中显著增加。结果表明，IAV感染导致炎症细胞因子持续高表达，对肺组织造成了损害。与V对照组相比，V利巴韦林组和V黄芩苷组的十种炎症细胞因子均显著降低。这表明利巴韦林和黄芩苷抑制了细胞因子风暴的发生。

  

MSD 用于检测炎症细胞因子的表达。

 

重要发现

PCR和Western blot用于测量RLRs信号通路中一些关键因子的变化。MSD电化学发光用于测量包括IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12p70和KC/GRO在内的肺部炎症细胞因子的表达。流式细胞术用于检测Th1、Th2、Th17和Treg的比例。

 

结果显示，IAV感染导致体重下降、病毒载量增加，以及RIG-I、IRF3、IRF7和NF-κB mRNA及RIG-I和NF-κB p65蛋白的高表达。然而，黄芩苷减缓了体重下降的速度，抑制了病毒复制，并下调了RLRs信号通路的关键因子。此外，黄芩苷降低了肺部高表达的炎症细胞因子，并减少了Th1/Th2和Th17/Treg的比例，从而引发了一种短暂但不过度的炎症反应。

 

因此，黄芩苷激活了一种平衡的宿主炎症反应，限制了免疫病理损伤，有助于改善临床和生存结局。