本周分享的是LabEx采用BD Celesta（3激光12色）进行小鼠PBMC胞及Th1,Th2，Th17 七色分析实例。
整个panel全部为包括表面marker和核内转录因子，抗体使用量按照厂商推荐。
样本类型：小鼠肿瘤
仪器：BD Celesta
实验Panel：
实验设置：
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类型 |
管数 |
作用 |
|
Blank |
1 |
调节电压，确认阴性细胞群位置 |
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单阳管 |
8 |
调节补偿 |
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样本管 |
1 |
正式样本管 |
实验步骤：
1、PBMC细胞计数（1.0x106/ml）
2、24孔板种板，每孔1ml
3、细胞刺激：
3.1、每孔加入2ul刺激阻断剂；
3.2、37℃、5％CO2下孵育4-6小时；
3.3、孵育结束后吸取培养液至新的EP管中，300g离心5min；
3.4、弃上清，用1ml PBS重悬细胞沉淀，300g离心5min；
3.5、弃上清，用剩余液体重悬，用于后续实验操作；
4、细胞染色：
按照Live/Dead、FcR阻断剂、表面、破膜、胞内核内的顺序进行染色。
实验结果
实验试剂
| 货号 | 名称 | 品牌 |
| 557659 | Ms CD45 APC-Cy7 30-F11 | BD Pharmingen |
| 557984 | Ms CD3e Alexa 700 500A2 | BD Pharmingen |
| 553046 | Ms CD4 FITC RM4-5 | BD Pharmingen |
| 551162 | Ms CD8a PerCP-Cy5.5 53-6.7 | BD Pharmingen |
| 563854 | Ms IFN-Gma BV650 XMG1.2 | BD Pharmingen |
| 560699 | Ms IL-4 PE-Cy7 11B11 | BD Pharmingen |
| 559502 | Ms IL-17A PE TC11-18H10 | BD Pharmingen |
| 564406 | Fixable Viability Stain 510 | BD Pharmingen |
| abs9101 | 1*红细胞裂解液 | Absin |
| abs7008 | 70um细胞过滤器 | Absin |
| abs9484 | RPMI-1640培养基 | Absin |
| abs972 | 胎牛血清（优级） | Absin |
| abs962 | 1*PBS | Absin |
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