本周为大家带来的文献为发表Cell Death Discov. (IF: 6.1)的” CCL11 released by GSDMD-mediated macrophage pyroptosis regulates angiogenesis after hindlimb ischemia”。本文使用了LabEx提供的Luminex检测服务。

周围血管疾病（PVD）随着老年人口增加、生活质量提高和饮食结构变化而日益严重，导致致残率和死亡率上升。重度肢体缺血（CLI）是一种常见的PVD，由动脉狭窄或闭塞引起，表现为间歇性跛行、静息痛和缺血性溃疡等症状。

传统治疗方法如血管成形术、支架植入和旁路手术虽有成效，但具有侵入性，且无法解决缺血区域新生血管不足的问题。促进新生血管生成对PVD患者的灌注和功能恢复至关重要。

焦亡是一种新型的程序性细胞死亡形式，Gasdermin D（GSDMD）是其关键蛋白。GSDMD在细胞膜上形成孔洞，引发细胞破裂和炎症因子释放，影响血管生成。虽然IL-1β被证明可促进血管生成，但IL-18的作用则存在争议。

本研究使用GSDMD缺陷（Gsdmd-/-）转基因小鼠，揭示GSDMD在后肢缺血（HLI）后对血管生成的影响，证明GSDMD介导的焦亡通过调节细胞因子的产生和分泌来影响灌注恢复，旨在发现新的PVD治疗靶点。

LabEx提供的Luminex检测服务

血样在HLI后3天从野生型（WT）和GSDMD缺陷（GSDMD-/-）小鼠中获得。使用Luminex Flowmetrix系统X-200（Luminex）开发了一种基于多重珠子的检测方法，以检测血清中的细胞因子水平。使用Bio-Rad的多重检测试剂盒（LX-MultiDTH-27）对小鼠的血清样本进行了多重检测。首先，在含有珠子的板孔中加入50微升稀释的标准品或血清样品，并在室温（RT）下孵育30分钟。接着，每孔加入25微升生物素标记抗体，并在RT下孵育30分钟，然后加入藻红蛋白标记的链霉亲和素并再孵育30分钟。最后，使用Flowmetrix软件计算荧光强度来测量珠阵列中的细胞因子浓度。

研究结果显示，接受HLI的GSDMD缺陷小鼠血清中CC基序配体11（CCL11）水平较低，这表明焦亡对缺血后血管生成和灌注恢复的影响可能是由CCL11引起的。

重要发现

研究发现，GSDMD介导的焦亡发生在HLI中，GSDMD缺失在体内和体外均加剧了灌注恢复和血管生成。然而，GSDMD如何调节缺血后血管生成仍不清楚。研究进一步发现，GSDMD介导的焦亡在HLI后通过巨噬细胞而非内皮细胞发挥促血管生成作用。GSDMD缺失导致小鼠血清中CCL11水平降低，巨噬细胞中GSDMD敲低下调了CCL11的表达和释放。此外，重组CCL11改善了内皮细胞功能和血管生成，但CCL11抗体削弱了这种效果。综上所述，GSDMD通过释放CCL11促进血管生成，从而改善后肢缺血损伤后的血流灌注恢复。因此，CCL11可能是预防和治疗血管缺血性疾病的新靶点。