本周为大家带来的文献为发表于Hum Vaccin Immunother. (IF: 4.8)的” Recombinant BCG vaccine expressing multistage antigens of Mycobacterium tuberculosis provides long-term immunity against tuberculosis in BALB/c mice”。本文使用了LabEx提供的Luminex检测服务。

几千年来，结核病一直威胁着世界人类。尽管唯一获批使用的结核病疫苗卡介苗已在全球广泛使用了几十年，但结核病的流行仍带来了挑战。设计新型结核病疫苗的方法有多种，包括亚单位疫苗、减毒活疫苗和重组卡介苗。然而，它们都无法取代卡介苗。该研究中，研究者构建了表达由 ESAT-6、CFP-10 和潜伏抗原 DnaK 表位富集区组成的融合蛋白的 rBCG-ECD003。我们通过测定 BALB/c 小鼠的多种细胞因子分泌能力、多功能 CD4+T 细胞亚群和体液免疫反应来评估其免疫原性。此外，我们还验证了 rBCG-ECD003 对小鼠体内 Mtb 生长的体外疗效及其安全性。总之，研究结果表明 rBCG-ECD003 有可能提高卡介苗的长期有效性。

LabEx提供的Luminex检测服务：

在多重细胞因子检测中，将脾脏淋巴细胞悬浮液以 1 × 105 个细胞/孔的比例接种到 96 孔 U 型底平板中，分别用 10 μg/ 孔的 PPD、ECD003 和作为阴性对照的培养基刺激。在 37°C 孵育 24 小时后，用 400 g 离心机离心 5 分钟，收集上清液。按照制造商的说明（LabEx），用 Luminex 多重细胞因子检测法检测细胞因子的产生，包括 IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-12、IL-4、IL-10、IL-6、IL-17 和 GM-CSF。

为了研究小鼠接种 rBCG-ECD003 疫苗后的综合免疫力，我们比较了第 4 周和第 12 周 9 种细胞因子的产生情况。不出所料，除 TNF-α 外，PBS 组的主要测试细胞因子产量在各组中保持在最低水平。

用 rBCG-ECD003 免疫 BALB/c 小鼠脾脏淋巴细胞的细胞因子产生情况。

重要发现：

本研究评估了表达特定抗原ESAT-6、CFP-10和nDnaK的重组卡介苗（rBCG-ECD003）在免疫BALB/c小鼠后不同时间点的免疫效果。

结果显示，与亲代卡介苗相比，rBCG-ECD003 能诱导多种 Th1 细胞因子分泌，包括 IFN-γ、TNF-α、IL-2 和 IL-12。

在 PPD 或 ECD003 的作用下，rBCG-ECD003 免疫可显著增加 IL-2+ 和 IFN-γ+IL-2+ CD4+T 细胞的比例。

rBCG-ECD003 能诱导更强的长期体液免疫反应，而不影响亲代卡介苗的安全性。
通过体外保护效力试验，rBCG-ECD003 显示出更强的长期抑制 Mtb 生长的能力。

rBCG-ECD003 的这些特点表明它具有长期保护作用，并有望控制 Mtb 感染。