ELISpot（enyzme-linked immunospot，酶联免疫斑点法）可以定量测量单个细胞分泌的细胞因子的数量。Cecil Czerkinsky于1983年首次描述了ELISpot，作为一种新的方法，用于定量测量杂交瘤细胞产生的特异性抗原免疫球蛋白。在1988年，Czerkinsky开发了一种ELISA斑点检测法，用于定量测量T细胞分泌淋巴因子的分泌。

ELISpot实验中，将细胞置于包被有特异性抗体的96孔板中培养，在有刺激的条件下，细胞分泌的细胞因子或免疫球蛋白会被包被抗体捕获。移除细胞后，被捕获的细胞因子可进一步使用生物素标记的二抗来标识，其后再与酶标记的亲和素作用，并加入底物使其呈色，有反应作用的细胞会留下直径大小不等的染色斑点。

ELISpot试验原理

ELISpot结果展示

作为目前最敏感的分子检测方法之一，ELISpot表现出了比ELISA高达20至200倍的敏感度。因为被分析物分泌后立刻和捕获抗体结合，ELISpot分析物不会受到结合蛋白和蛋白酶的破坏。包括高敏，高可信度，高通量检测和不破坏免疫功能在内等优势使得这个方法成为研究小规模活细胞群的实用工具。

ELISpot发展

ELISpot的技术改进主要有双色ELISpot和FluoroSpot。双色ELISpot应用两种不同的显色底物来区分表达两种不同分析物的细胞。通过这个技术，可以在一个孔中同时区分多达三个不同的细胞群。FluoroSpot测定中使用了荧光染料，还使用标签标记的检测抗体来分析同一孔中的两种或多种分析物。目前，FluoroSpot可以使用荧光团标记的检测试剂并行检测多达四种分析物1。

ELISpot应用

ELISpot广泛应用于多个免疫相关的领域：

免疫学基础研究：T细胞和B细胞，Th0/Th1/Th2细胞转换分析。通过ELISpot检测临床试验和候选疫苗试验中的抗原特异性T细胞免疫的金标准。Elispot也可用于通过使用其他细胞因子来区分活化T细胞的不同亚群，例如T辅助细胞（Th）1型细胞（特征在于产生IFN-γ，IL-2，IL-6，IL-12，IL-21和TNF-α），Th2（产生IL-4等细胞因子， IL-5，IL-10和IL-13）和Th17（IL-17）细胞。

疫苗研究：ELISpot是检测和评价疫苗的细胞免疫的有效方法。国际上普遍采用ELIS‍pot方法检测HIV疫苗研究中的免疫应答反应。在国际艾滋病疫苗行动计划中，采用ELISpot法对T细胞功能进行评价。

药物筛选：化合物和药物免疫学反应的筛选。Nature上一项研究使用IFN-γ ELISpot检测法来测量T细胞对非临床AAV5基因治疗的反应2。

感染性疾病诊断与研究：例如结核病的临床诊断，莱姆病、艾滋病等传染病的研究。对于结核分枝杆菌（MTB），IFN-γ ELISpot的低成本，高灵敏度和易用性让他成为了区别感染个体的潜在方法3。

肿瘤免疫研究：已用于分析和评价在癌症病人中诱导肿瘤特异的T细胞的疫苗试验。治疗前后特异性细胞免疫应答水平的检测，可有效评估治疗效果，对于治疗和用药提供重要的参考信息。如使用IFN-γ ELISpot，颗粒酶B ELISpot和穿孔素ELISpot在临床上检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL）频率和功能4。

自身免疫病研究：调整机体免疫调节功能，对自身免疫病的治疗提供更有效的措施。

过敏研究：参与过敏机制的细胞因子研究，如IL-4。

LabEx提供ELISPOT实验服务，可以检测包括IFN-γ、TNF、IL-6在内的人类或鼠的多个细胞因子。只要您提供样本，只需1~2周就可以提供实验服务结果。

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References:

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