巨噬细胞和许多趋化因子与骨髓间充质干细胞(MSCs)成脂分化密切相关，但它们在成脂过程中的作用及其机制尚不完全清楚。接下来小备就分享这篇文献运用Luminex技术检测CXCL1, IL‐6, MCP‐1, and TNF‐α细胞因子的文献。

研究思路：

1、首先在体外研究了巨噬细胞对MSCs分化的影响。

2、与MSCs共培养主要诱导巨噬细胞向M2极化方向发展。                            

3、阻断CXCR2降低了脂肪形成初期p38和EIk1的磷酸化。

研究结果：

1、RAW246.7细胞对间充质干细胞脂肪细胞分化的影响

为了研究巨噬细胞在脂肪细胞分化过程中的作用，骨髓间充质干细胞分别在AIM和不含或

不含的情况下培养RAW246.7巨噬细胞。结果表明，RAW246.7巨噬细胞诱导MSCs发生凋亡，使MSCs的绝对数量减少，可进入脂肪形成的MSCs池减少。

2、细胞因子的特征和共培养后的AKT/p65信号通路及共培养后巨噬细胞M1/M2极化的影响

在体外成脂过程中，共培养组上清液中细胞因子丰度增加。WB分析显示，与其他组相比，MSC + RAW组AKT和p65磷酸化水平显著下调。与未共培养的RAW264.7细胞相比，在整个实验过程中IL‐10和IL‐1β水平都在升高。这些结果表明，MSC + RAW246.7共培养所形成的微环境主要诱导RAW246.7在脂肪形成过程中极化成M2巨噬细胞，而不是诱导成M1巨噬细胞。

3、CXCL1和CXCR2的表达分别对MSC分化的影响

CXCL1蛋白用Luminex分析结果显示，在第10天，在MSCs成脂分化过程中巨噬细胞的缺失，随后减少到基础水平。与未共培养的MSCs相比，从第10天到诱导结束，CXCL1水平下降。CXCR2的mRNA水平在第5天开始下降约3倍，CXCR2蛋白的表达在第10天达到峰值，然后在成脂分化过程中下降。C/EBPα和PPARγ的蛋白和mRNA的表达也得到了类似的结果。

4、CXCR2通过p38、ERK和EIk1影响分化

经U0126‐处理细胞，油红O染色强度明显降低。WB分析显示，C/EBPα、PPARγ和FABP4蛋白在对照MSCs中表达较高。在脂肪细胞分化的第10天和第20天，SB225002处理的MSCs中ERK磷酸化水平显著降低。随后检测了p38的表达，并发现在SB225002处理的MSCs中，p38的磷酸化水平在24小时内显著下降。

总结：

1、RAW246.7巨噬细胞与MSCs共培养能强烈阻断细胞分化进程，在脂肪形成过程中，抑制CXCL1的表达。

2、与MSCs共培养主要诱导巨噬细胞向M2极化方向发展。

3、阻断CXCR2降低了脂肪形成初期p38和EIk1的磷酸化，但增加了细胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化，从而抑制了脂肪形成后期p38/ERK‐EIk1的磷酸化。

总之，研究表明在成脂分化过程中MSCs与巨噬细胞相互作用，CXCR2通过改变p38/ERK‐EIk1信号通路的激活来调控MSCs的成脂分化。

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