细胞因子释放综合征（cytokine release syndrome, CRS）是大量免疫细胞被激活，导致释放大量细胞因子引发的严重全身炎症反应综合征，包括白细胞介素，干扰素，肿瘤坏死因子等。新型冠状病毒肺炎患者发展为重症病例的主要原因是CRS。细胞因子风暴会造成多器官功能障碍。

如何设计体外细胞因子释放实验

首先分离外周血单个核细胞（PBMC），用药物进行刺激（6-72h）,收集细胞培养上清检测细胞因子的表达。一般每个组别要设置不少于6个不同来源的细胞进行研究。主要研究的细胞因子包括：IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12等。阴性对照组：PBS、培养基、同型对照等；阳性对照：LPS（脂多糖），丝裂原（mitogen）等。

检测方法

1、电化学发光技术

MSD电化学发光检测技术使用Sulf-tagTM标记物，在MULTI-ARRAY和MULTI-SPORT微孔板的电极表面通电后，电化学作用激发Sulf-tagTM标记物发出强光。

高灵敏度、宽线性范围 ：线性范围可达 6log  灵敏度 <0.05~1pg/mL

高重复性：板内CV< 6-8%，板间< 10%，批间< 15% 

2、液态流式技术（Luminex）

流式荧光，又称悬浮阵列、液相芯片等，是近20多年逐渐发展起来的多指标联合诊断技术。该技术以荧光编码微球为核心，集流式原理、激光分析、高速数字信号处理等多种技术于一体，多指标并行分析，最多可一管同时准确定量检测2-100种不同的生物分子；具有高通量、高灵敏度、并行检测等特点；可用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体、配体识别分析等多方面、多领域的研究。

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