一、细胞表面抗原数量测定

细胞表面抗原表达一般大于5*105时，药物才能发挥较好的杀伤活性，同时靶标的选择与正常组织具有最小的交叉反应性和免疫原性。检测细胞或者组织中的表达可以通过RT-PCR来检测mRNA的表达量或者Western Blot来检测蛋白水平的表达，但是两种技术达不到绝对定量的作用，这里介绍一种用流式细胞术对细胞表面抗原数量进行定量的方法。BD Quantibrite ™ Beads PE Fluorescence Quantitation Kit（340495）。

1）基本原理

①建立抗原数量和PE荧光强度之间的数量关系；

②通过测定细胞所带PE荧光强度推算抗原数量。

二、应用

受体介导的抗体-药物结合物（Antibody-Drug Conjugates ,ADC）是通过一个化学链接将小分子药物连接到单抗上，单抗会将药物靶向到目标细胞。其中靶点与正常组织具有最小的交叉反应性和免疫原性，细胞表面抗原数量测定可以确实抗原是否具有特异性。

三、实验步骤

①细胞悬液：设置流式Blank组、ISO对照以及样本管，细胞密度2x105/管；

②样本/ISO管100ul 1xPBS重悬加入4ul荧光抗体，2-8°C 避光孵育 30分钟。随后加 1ml 1xPBS清洗细胞两次，离心 300g，5min，200 µl 1xPBS重悬，流式细胞仪上机分析；

③BD Quantibrite™PE用500ul 1xPBS重悬，流式细胞仪收集信号。

四、数据展示

①PE定量微球结果：

②PE荧光微球对数作图：

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