优宁维实验服务之IHC/ICC（免疫组化/免疫荧光）实验服务

客户提供：样本：细胞涂片、细胞爬片、组织冰冻切片、组织石蜡切片；或组织、蜡块均可。
     一抗（亦可由优宁维提供或代购，费用另计）

送样须知：市内可上门取样；外地可邮寄样本。

信息保护：优宁维公司对客户项目的专有技术和资料（包括试验方案、试验结果和样品等）负有绝对的保密责任

免疫组化原理：

免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

问题及其解答：

产生组织切片非特异性染色的原因有哪些？如何解决？

   1)、抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。

   2)、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。
 

   3)、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；

   7)、标本染色过程中经常出现干片，这容易增强非特异性着色。

免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些？

   1)、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不知抗体是进口的还是国产的工作液，怎么这么高稀释度也没能做出阳性结果？另外，不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果，抗原抗体反应有前带和后带效应，必须摸索最佳浓度。

   2)、抗原修复不全，对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合；建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验，这是最佳的时间和次数。若不行，还可高压修复。

   3)、组织切片本身这种抗原含量低；

   4)、血清封闭时间过长。

   5)、DAB孵育时间过短。

   6)、细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应。

   7)、开始做免疫组化，我建议你一定要首先做个阳性对照片，排除抗体等外的方法问题。

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